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    Gibco™ Zeocin™ Selection Reagent 博莱霉素

    货号
    R25001
    售价
    2980
    规格
    8 x 1.25 mL
    CAS号
    11006-33-0
  • 产品简介
  • 相关产品
  • 产品信息:

    品牌

    货号

    品 名

    规格

    促销价

    Invitrogen

    R25001

    Zeocin博莱霉素

    1.25 ml

    420

    Invitrogen

    R25001

    Zeocin博莱霉素

    8 x 1.25 ml

    2980

    产品简介

            Zeocin是腐草霉素D1Phleomycin D1)的商业名称,其中文名称博来霉素是一种铜离子螯合的糖肽抗生素(来源于链霉菌Streptomyces verticillus的突变株),铜离子的存在使其呈蓝色,此铜螯合的形式为无活性。当抗生素进入细胞后,二价铜离子(Cu2+)被还原为一价铜离子(Cu+),并被细胞内的巯基化合物去除。铜离子被去除后,Zeocin被活化,嵌入DNA使其断裂,最终导致细胞死亡。博来霉素是作用谱广泛,对细菌、真核微生物、植物和哺乳动物细胞具很强的毒性。博来霉素常用作一种非常有效的工具抗生素,用来筛选携带Sh ble抗性基因并能稳定表达分子量为13.665 kDa的一种博来霉素抗性蛋白的细胞株。博来霉素是的用量为 50-2000 ug/ml(通常 300 ug/ml),具体取决于细胞类型。

    提供无菌溶液形式的Zeocin,浓度是100mg/ml,使用起来更加方便,只需直接加入培养基到所需工作浓度即可。


    产品性质

    分子式(Formula):C55H85O21N20S2Cu - HCl

    Cas: 11006-33-0

    分子量(Molecular Weight):1535

    外观(Appearance):蓝色粉末

    内毒素:<1 EU/mg

    纯度(Purity):>90%(HLPC)

    溶解性:易溶于水(>500 mg/ml


    应用参考浓度:

    1)大肠杆菌筛选:25-50μg/mL(低盐LB培养基,NaCl浓度不能超过5g/L

    2)酵母菌筛选:50-300μg/mLYPD或基本培养基)

    3)哺乳动物细胞筛选:50-1000μg/mL(合适培养基,根据细胞系而不同)


    使用步骤参考

    一、细胞对Zeocin敏感性的确定(杀灭曲线建立)

    重新铺板或者将满盘细胞重新分盘,使得细胞密度约25%,按照8个平板/组准备,培养24h,去除旧培养基。

    加入含不同浓度Zeocin的筛选培养基,Zeocin浓度可设置为0, 50, 100, 200, 400, 600, 8001000 μg/ml,每个浓度做3个平行;也可根据自身实验体系,设置不同的浓度梯度。

    3-4天更换新鲜的筛选培养基,并观察存活细胞的比例。选择在合适时间(1-2周内)杀死大多数细胞的浓度为最加工作浓度。【注】:若是难以在显微观察下区分活细胞,建议使用台盼蓝染色来计算存活细胞的数量,以确定Zeocin的最适浓度。

    二、筛选稳定转染细胞系

    转染细胞,用100mm培养皿进行培养。以未转染的细胞作为阴性对照。

    转染后,用预热的1X PBS洗涤一次,加入新鲜培养基。

    转染48-72h后,用含有最加浓度Zeocin(由灭杀曲线确定)的新鲜培养基筛选细胞。为了更好的鉴定和筛选细胞集落,建议将细胞按比例稀释成一系列浓度。

    【注】:若待筛选细胞对Zeocin的抗性明显强于大部分细胞,按照以下方法克服此类耐性:用含Zeocin培养基进行细胞分盘,置于37°C孵育2-3h,使得细胞贴壁。然后将细胞置于4°C2h。记得使用Hepes作为培养基的缓冲体系。重新将细胞置于37°C孵育。4°C孵育细胞的目的是短时间内终止细胞分化,使得Zeocin能发挥作用,杀死细胞。

    3-4天更换新鲜的选择培养基,直到出现细胞集落。

    挑选并转移克隆到9648孔板中。在进行更大孔径培养板或培养皿上扩大培养之前,确保培养细胞密度近100%

    三、稳定转染细胞系的维持培养

    可采取以下方式维持培养稳定转染细胞:

    1)使用含相同剂量Zeocin的筛选培养基来维持培养;

    2)降低Zeocin剂量为原来的一半进行维持培养;

    3)使用正好能预防敏感细胞生长但不足以致死的Zeocin剂量来维持培养【根据杀灭曲线来判断】。