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    D-Luciferin, Potassium Salt D-荧光素(钾盐 )

    货号
    售价
    规格
    10mg
    CAS号
    115144-35-9
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    哺乳动物发光,一般是将萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)基因整合到需观察细胞的染色体DNA上,以表达荧光素酶,培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株,当细胞分裂、转移、分化时,荧光素酶也会得到持续稳定的表达。标记后的荧光素酶只有在活细胞内才会产生发光现象,并且发光强度与标记细胞的数目呈线性相关。除萤火虫荧光素酶外,有时也会用到海肾荧光素酶(renilla luciferase)。二者的底物不同,萤火虫荧光素酶的底物是荧光素(D-luciferin,常见钾盐或者钠盐)。二者的发光波长也不一样,前者发光波长在540-600 nm,后者发光波长在460-540nm。荧光素所发的光更容易透过组织,在体内代谢较慢,而且特异性好。所以大部分活体成像实验采用萤火虫荧光素酶基因作为报告基因。

    外观:淡黄色粉末
    溶解性:water 50mg/ml;
    纯度:>98%,实测大于99%
    储存条件:避光-20℃储存

    产品用途:D-Luciferin作为荧光素酶的底物,存在于多种发光生物体中。在ATP和荧光素酶的催化作用下,荧光素被氧化,产生蓝绿色的光(560nm),当底物过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关。编码荧光素酶的Luc基因是植物、细菌、哺乳动物细胞的常见报告基因。由于没有背景干扰,因此可以很容易检测出低至0.02 pg水平的荧光素酶。

     

    荧光素钾盐操作方法

     

    一:体外生物发光试验荧光素试剂的制备
    材料
    —D-荧光素,钾盐D-luciferin,potassium salt 
    —无菌纯水
    —完全培养基(自行配置)
    步骤
    1. 用无菌水制备200X荧光素原液(30mg/ml),轻轻颠倒摇动至荧光素完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。
    2. 将D-luciferin,potassium salt 溶解于预热好的组织培养基中制备成浓度为150 μg/ml的工作液。用组织培养基1∶200稀释储存液,配置工作液(终浓度150μg/mL)。
    3. 去除培养细胞的培养基。
    4. 图像分析前,向细胞培养板中添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析。
    —注射器滤膜过滤除菌,0.2 μ m
    *提示:成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。

     

    二:活体成像分析
    材料
    —D-荧光素,钾盐 D-luciferin,potassium salt 
    —D-PBS,不含钙、镁(细胞培养级)
    1:用无菌的DPBS(w/o Ca2+ ;Mg2+)配制D-荧光素钾盐工作液(15mg/ml),0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存,避免反复冻融。一旦使用,放到4℃解冻,保持冰冷且避光。
    2:注射量取决于注射方式,具体如下:

    注射方式

    剂量

    静脉注射(25-27gauge针头)

    按10µl/g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液

    腹腔注射(25-27gauge针头)

    按10µl /g体重浓度,加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液

    肌肉注射(27gauge针头)

    50µl,浓度为1-2mg/ml荧光素工作液

    鼻内注射(pipette)

    50µl,浓度为3mg/ml荧光素工作液

    3: 注射入体内10-20 min(待光信号达到最强稳定平台期),再进行成像分析。
    注意:建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线,从而确定最高信号检测时间和信号平台期。保存和操作的过程中都要避光。另外水溶性储存液过滤除菌后,可以-20℃或-80℃分装冻存,避免反复冻融。如果有条件,对储存液充氮气或氩气(防止氧化),稳定性和保存时间更长,长达1年。 注射方式,动物类型以及体重等都会影响信号的发射,因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线,确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。荧光素钾盐和荧光素钠盐应用上没有差别,两者的差别在于物理性状上如外形和溶解性。钠盐的水溶性高于钾盐。从目前发表的文献来看,钾盐的使用率远高于钠盐,尤其是体内实验。两者功效相同。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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