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    染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)——ChIP-IT® Express 染色质免疫共沉淀试剂盒

    染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP——ChIP-IT® Express 染色质免疫共沉淀试剂盒

           染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。其原理是:在生理状态下用甲醛把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为均一的小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,使用DNA结合蛋白特异性的抗体将目的蛋白和DNA复合物沉淀下来。复合物经过洗涤,解交联,蛋白酶K消化去除DNA结合蛋白,经纯化得到感兴趣的DNA片段。纯化的DNA片段可用于后续的分析,比如qPCR,测序,ChIP-chipChIP re ChIP等。

           Active motif公司的ChIP-IT® Express试剂盒使用protein G包被的磁珠,代替传统的琼脂糖珠,使得ChIP实验可以在1天之内完成。试剂盒可以使用超声法或酶切法进行染色质的断裂处理。每种方法都提供快速、可重复的操作步骤,省时省力,实验者更容易获得成功的ChIP结果。

    1 ChIP-IT® Express试剂盒的操作流程


    ChIP-IT® Express试剂盒的优点

    ● 组分完整——提供ChIP实验所需的所有试剂;

    ● 可用于检测蛋白/DNA的相互作用,不仅仅限于组蛋白的修饰;

    ● 与全基因组分析或PCR相关的方法兼容;

    ● 无需进行试剂和操作步骤的优化;

    ● 无需酚/氯仿抽提步骤——试剂盒包含DNA纯化柱,可对DNA进行快速纯化

    传统的ChIP实验都是使用染色质组成相关的抗体,如乙酰化组蛋白抗体。然而对于启动子转录活性分析而言,这无法揭示出是哪种转录因子结合到我们感兴趣的启动子上。相比之下,使用转录因子特异性抗体,能够直接监测转录因子和DNA的相互作用,但是这种技术与传统的ChIP相比具有更大的挑战,需要准备多种复杂的缓冲液,抑制剂混合物和封闭试剂等。而且在缺少抗体、对照和验证的实验流程下,很难对ChIP结果进行验证。为了解决这些问题,使得ChIP实验同时适用于转录因子和组蛋白,Active motif公司的ChIP-IT® Express试剂盒提供ChIP实验所需的所有试剂,包括阳性对照和阴性对照,使得研究者更容易成功的操作ChIP

    图2: 改良的ChIP(使用ChIP-IT Express试剂盒)

    PCR分析ChIP后的DNA。典型的ChIP实验每次需要2000,000个细胞,使用ChIP-IT Express试剂盒,仅需要100,000或更少的细胞既可获得阳性的ChIP结果。

    1%的甲醛固定Hela细胞10分钟,使用超声法破碎染色质,使用阴性对照IgGRNA pol II抗体,对不同细胞数量来源(100,000750,000个细胞)的染色质进行ChIP,重复2次。使用阳性对照引物GAPDHChIP后的DNA进行36个循环的PCR分析(抗体和引物包含在人ChIP-IT对照试剂盒里,Active motif也可以提供小鼠和大鼠对照试剂盒)。取10ul PCR产物进行1%凝胶电泳,EB染色后紫外观察。结果显示与使用阴性对照IgG相比,使用RNA pol II抗体的ChIP大量富集了GAPDH启动子区域的DNA序列。

    相关产品信息

     供货商

     产品编号

     产品名称 

     规格

     Active Motif

     53008

     ChIP-IT® Express

     25 rxns

     Active Motif

     53009

     ChIP-IT® Express Enzymatic

     25 rxns

    除此之外,Active motif公司还提供特殊应用的ChIP试剂盒以及多种ChIP相关的的辅产品。


    供货商

     产品编号

     产品名称

     规格

     产品说明

     Active Motif

     53014

     ChIP-IT® Protein G Magnetic Beads

     25 rxns

     Protein G包被的磁珠

     Active Motif

     53016

     Re-ChIP-IT®

     25 rxns

     双重ChIP

     Active Motif

     53018

     ChIP-IT® Express HT

     96 rxns

     高通量ChIP,一次可同时使用96分样本

     Active Motif

     53019

     Ready-to-ChIP Hep G2 Chromatin

     10 rxns

     即用型的ChIP实验用染色质

     Active Motif

     53020

     Ready-to-ChIP K-562 Chromatin

     10 rxns

     Active Motif

     53021

     Ready-to-ChIP NIH/3T3 Chromatin

     10 rxns

     Active Motif

     53015

    Ready-to-ChIP HeLa Chromatin

     10 rxns

     Active Motif

     53026

     ChIP-IT® Control qPCR Kit – Human

     5 rxns

     ChIP对照试剂盒,包含阴性对照IgG和阳性对照

     RNA pol II抗体和PCR引物

     Active Motif

     53027

     ChIP-IT® Control qPCR Kit – Mouse

     5 rxns

     Active Motif

     53028

     ChIP-IT® Control qPCR Kit – Rat

     5 rxns

     Active Motif

     53010

     ChIP-IT® Control Kit – Human

     5 rxns

     Active Motif

     53011

     ChIP-IT® Control Kit – Mouse

     5 rxns

     Active Motif

     53012

     ChIP-IT® Control Kit – Rat

     5 rxns

     Active Motif

     53032

     ChIP-IT® Express Shearing Kit

     10 rxns

     超声法染色质处理试剂盒

     Active Motif

     53035

     ChIP-IT® Express Enzymatic Shearing Kit

     10 rxns

     酶切法染色质处理试剂盒

     Active Motif

     53040

     ChIP-IT® High Sensitivity

     16 rxns

     高灵敏ChIP试剂盒,适用于低丰度转录因子、

     低亲和力抗体或有限的样本

     Active Motif

     53041

     ChIP-IT® ChIP-Seq

     10 libraries

     ChIP-Seq剂盒

     Active Motif

     53045

     ChIP-IT® FFPE

     16 rxns

     适用于福尔马林固定,石蜡包埋组织样本的ChIP

     Active Motif

     53042

     ChIP-IT® PBMC

     16 rxns

     适用于外周血单核细胞的ChIP

     Active Motif

     53024

     RNA ChIP-IT®

     25 rxns

     用于研究RNA与细胞核染色质的相互作用

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