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    DNA甲基化检测(重亚硫酸盐处理)试剂盒

    DNA甲基化检测(重亚硫酸盐处理)试剂盒

           DNA甲基化是一种基本的表观遗传学修饰,在基因表达调控、发育调节、基因组印迹等方面发挥重要作用。在DNA甲基转移酶的催化下,CpG双核苷的胞嘧啶第5 位碳原子被选择性地添加甲基基团。 在人类肿瘤中,普遍发生甲基化异常的现象,由于甲基化与胚胎发育、细胞周期调控相关,因此DNA甲基化状态的变化可作为疾病诊断和预后的一个有用的指示器。

           最早在1970年,重亚硫酸盐转化就被用于鉴别DNA中的胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶(5-mC)。现在认为在重亚硫酸盐处理过程中,5-甲基胞嘧啶(5-mC)和5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)都不会发生碱基的变化,因此这种方法不能用来区别不同的甲基化修饰。在重亚硫酸盐转化过程中,DNA首先用重亚硫酸钠处理,在高温和低pH条件下,将变性DNA(单链DNA)中的胞嘧啶转化为胞嘧啶-重亚硫酸盐衍生物,这个反应是可逆的;接下来胞嘧啶-重亚硫酸盐衍生物发生不可逆的水解脱氨基过程,形成尿嘧啶-重亚硫酸盐衍生物。最后在高pH条件下尿嘧啶-重亚硫酸盐衍生物脱磺酸基形成尿嘧啶。只有未甲基化的胞嘧啶在重亚硫酸盐处理下发生碱基变化, 5-mC5-hmC仍然保持不变。转化处理后的DNAPCR扩增,尿嘧啶(U)转变为胸腺嘧啶(T)。重亚硫酸盐转化示意图如下:

     

    1 重亚硫酸盐处理将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶

           Active motif公司的Bisulfite Conversion Kit提供优化的转化试剂、简单易用的操作步骤以及阳性对照PCR引物,简化了DNA甲基化检测的过程。整个转化可在1.5小时之内完成,转化效率高达99%。试剂盒提供转化特异性PCR引物,可用于测序前验证重亚硫酸盐转化效率。阳性对照PCR引物适用于重亚硫酸盐转化处理的人和小鼠DNA,经PCR扩增可得到220 bp的产物。

    Active motif同时也提供MethylDetector™重亚硫酸盐修饰试剂盒,该试剂盒是Active motif公司最初提供的一款DNA甲基化检测试剂盒,原理和Bisulfite Conversion Kit一样,但转化时间需要5小时。

    2 Bisulfite Conversion Kit 操作流程

    使用Bisulfite Conversion Kit,将目的DNA用蛋白酶K处理,加入重亚硫酸盐转化试剂和DNA变性剂,在温度循环仪中进行快速热变性。经过1.5小时的DNA转化反应,样品加入到试剂盒里的DNA纯化柱,脱盐后洗脱DNA,可用于PCR或其他的下游实验。

    3 阳性对照转化特异性PCR引物可用于特异性扩增转化后的人和小鼠DNA

    使用Bisulfite Conversion Kit处理人(A)和小鼠(B)基因组DNA,处理(Bis)和未处理(Untr)的DNA分别用阳性对照转化特异性PCR引物进行PCR扩增分析。阳性对照PCR引物专门适用于经重亚硫酸盐转化的DNA,因此会扩增出220bp的条带,而未处理的DNA没有扩增出相应条带。

    订购热线:025-57795736     联系电话:15852927017 (微信同号)
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     供货商

     产品编号

     产品名称

     规格

    Active Motif

     55016

     Bisulfite Conversion Kit

     50 rxns

    Active Motif

     55001

     MethylDetector™

     50 rxns

    Active Motif

     55003

     Fully Methylated Jurkat DNA

     10 µg

    Active Motif

     55007

     Jurkat genomic DNA

     10 µg