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    细胞系的培养与传代——血清选择

    细胞系的培养与传代实验指南

    细胞系的培养与传代
    简介(INTRODUCTION)
    细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
    材料(MATERIALS)
    o  试剂(REAGENTS)
        完全培养基(RPML1640或DMEM),胰蛋白酶消化液,1XPBS
    o  试剂准备(REAGENT SETUP)
    1XPBS:NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO4•12H2O 3.63g,KH2PO4 0.24g,溶于900ml;双蒸水中,用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,高温灭菌后4℃保存,也可配制10XPBS室温保存;
    完全培养基:90%液体培养基+10%小牛血清(特殊需要会标注在培养基说明书上);
    胰蛋白酶消化液:0.25g的胰蛋白酶和0.02g的EDTA加入1XPBS,终体积为100ml,pH7.4,0.22um滤过除菌分装,4℃保存。
    o  器械(EQUIPMENT)
    EP管、15ml离心管、离心机、细胞培养箱
    实验步骤(PROCEDURE)
    贴壁细胞传代与培养 ►预期时间消耗:30min
    1.  倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否需要传代,并将培养基与PBS置于37℃水浴,
    胰酶消化液室温放置,点燃酒精灯,将所需试剂摆放到相应位置;
    2.用1ml枪头弃去培养皿中上清液,加入3ml 1XPBS洗涤两遍,加入胰酶消化液1ml,轻轻摇晃后放于细胞培养箱中1min(可酌情增加时长),可以放在倒置显微镜下观察,当细胞收回突起变圆即可;
    3.加入6ml培养基并吹打培养皿底,将细胞移入离心管中,1000rpm 3min离心;
    4.弃上清,加入1ml培养基吹打均匀,用细胞计数板计数后取需要的细胞数量加入到新的培养基中,摇晃均匀;
    5.放置培养箱中培养,可以每天观察,期间如果细胞培养基营养不够可更换成新鲜培养基。
    ▲关键步骤:控制好消化时间,有些贴壁细胞贴壁较紧,需要确保吹打均匀。
    悬浮细胞传代与培养 ►预期时间消耗:30min
    1.倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否需要传代,并将培养基与PBS置于37℃水浴,胰酶消化液室温放置
    2.点燃酒精灯,将所需试剂摆放到相应位置
    3.将培养皿中培养基移入15ml离心管中,800rpm离心5min
    4.弃上清,用2ml 1XPBS洗涤两次,每次800rpm离心5min
    5.加入1ml完全培养基,细胞计数后取需要的细胞数量加入到新的培养基中,摇晃均匀
    ▲关键步骤:吹打细胞需要轻柔,并且混合均匀。
    针对性建议(TROUBLESHOOTING)
    细胞培养条件会根据不同细胞要求不同,以下是总结的条件:
    1. 293:人肾上皮细胞, 10%FBS DMEM,从培养皿板底吹下传代;
    2. BHK‐21:幼地鼠肾细胞, 10%FBS DMEM,胰酶消化传代;
    3. NK92:人的 NK 细胞系(悬浮细胞系), 12.5%FBS +12.5%horseserum α‐mem, 100U/ml 的 IL‐2;
    4. MCF‐7:人乳腺癌细胞, 10%FBS DMEM, PBS 冲洗两次胰酶消化传代;
    5. L929: 1:3 传代,扩大培养去上清。长满后取走上清,换新鲜培养基,过 2,3 天可以取用,一共可以取两批;
    6. HT‐29:结肠癌细胞。 10%FBS DMEM, PBS 冲洗两次胰酶消化传代;
    7. 293T: 10%FBS DMEM,从培养皿板底吹下传代;
    8. DC2.4: 10%FBS DMEM,胰酶消化传代;
    9. Hela: 人宫颈癌细胞。 10%FBS DMEM, PBS 冲洗两次胰酶消化传代。 2ml 长三天满;
    10. Thp1: 10%FBS 1640 培养, 3 天一代,细胞长过影响状态,小瓶留 2ml 传代,大瓶留 7ml 传代;  
    11. HepG2:人肝癌细胞系。 10%FBS DMEM, PBS 冲洗两次胰酶消化传代;
    12. LO2: 正常 10%FBS DMEM, PBS 冲洗两次胰酶消化传代;
    13. Huh 7: 人肝癌细胞系。 10%FBS DMEM, PBS 冲洗两次胰酶消化传代;
    14. Hepa1‐6(mice liver cancer cells): 10%FBS DMEM, PBS 冲洗两次胰酶消化传代;
    15. NCTC 1149(mice liver cells): 10% horse serum DMEM, PBS 冲洗。

           bob综合app手机客户端生物代理的NEWZERUM新西兰品牌血清品牌具有百年历史,血源来源新西兰和澳大利亚具有出口资质的屠宰场,最大单批次量可达 2000L,确保同一批次质量同时提供充足的血清供应七次无菌过滤,最后三次为0.1 µm无菌过滤处理,进行细菌、真菌、支原体、病毒及病毒抗体检测,符合国际动物协会要求

    产品详情

    产品名称

    货号

    规格

    目录价格

    特级胎牛血清

    FBS-P500

    500ML

    6000

    特级胎牛血清

    FBS-P100

    100ML

    1200

    描述:
           内毒素含量极低 <5EU/ml(国际规定:特级胎牛血清<10 EU/ml)
           极利于细胞的生长和传代 ,适合各种细胞培养
           每个批号血清均具有完整的检验报告
           七次无菌过滤,最后三次为0.1 µm无菌过滤处理
           进行细菌、真菌、支原体、病毒及病毒抗体检测,符合国际动物协会要求
           每个批号血清库存量达500-1000升,保证供应充足
    特点:
           极低内毒素,支持各类难养细胞;
           同批号跟踪发货,确保实验数据连续稳定;
           海外厂家直供,市场价格透明;
           十年诚恳信誉,温暖售后保证!
    建议使用范围:
          科研使用; 细胞培养

    推荐血清融化方法:

    操作

    温度

    100ml

    500ml

    1000ml

    第一步

    室温

    35 min

    90 min

    100 min

    1520℃水浴

    5 min

    18 min

    20 min

    第二步

    20℃水浴

    15 min

    25 min

    30 min

    第三步

    37℃水浴

    20 min

    35 min

    45 min

    注意:
    ♦ 在水浴过程中,血清的平面要完全浸在水中。在融化过程中要慢慢摇动,使血清混匀,但不要产生泡沫!
    ♦胎牛血清不推荐热灭活。
    储存:
           -20°C冻存,4°C保存不超过1个月。反复冻融会破坏血清中有效成分,影响血清品质。

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