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    20×Western超快转膜缓冲液——30min转膜

    20×Western超快转膜缓冲液——30min转膜

           超快转膜液使用独特配方,能高效超快地将蛋白转移到印迹膜(PVDF或硝纤膜)上。湿转法(Tank blot)或半干转法(Semi-dry blot)都可以使用。 

    超快和环保:能在15-35分钟内完成转膜过程。超快转膜液不使用甲醇,减轻了对实验者和环境的伤害。 

    兼容性好:超快转膜液能兼容Laemmli胶,预制胶,Bis-Tris胶等多种凝胶。

    转移效率高:超快转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率,有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。



    20×Western Rapid Transfer buffer

    产品组成:

    货号

    名称

    规格

    保存条件

    ZS401B

    20×Wester转膜缓冲液

    500ml

    RT

    说明书

    一份

    产品简介:

    我公司研发的超快转膜液使用独特配方,能高效超快地将蛋白转移到印迹膜(PVDF或硝纤膜)上。湿转法(Tank blot)或半干转法(Semi-dry blot)都可以使用。

    效:分子量100kD以下蛋白只需转膜30-40分钟。与传统转膜液相比,发热量更低。

    好:超快转膜液能兼容Laemmli胶,预制胶,Bis-Tris胶等多种凝胶。

    转移效率高:超快转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率,有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。

    贮存18-26℃常温贮存,有效期一年。

    使用说明:

    转膜前的准备:5-6张裁好的滤纸;裁好的转印膜;足够的1×超快转移buffer

    一、湿转法(Tank blot

    1、配制1×超快转膜液。

    11×Western超快转膜液:取50ml 20×超快转膜液,加入750ml双蒸水,混匀之后加入200ml甲醇,混匀即可。现配现用,配好后置于冰上存放。

    2、将滤纸和海绵浸泡在1×超快转膜液中,完全浸湿。

    3、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1×超快

    转膜液中。

    注意:在使用6%8%分离胶转移大分子蛋白时,应该降低甲醇含量至10%,以获得更好转移效果。

    4、按照以下顺序做好转印三明治结构。

    正极(阳 极)

    一块海绵(根据三明治的厚度觉得是否使用)

    1mm滤纸

    转印膜

    凝胶

    2mm滤纸

    一块海绵

    负极(阴极)

    注意: ①要彻底清除三明治结构中的气泡,适当补加1×超快转膜液保持三明治结构湿润。

                PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。

               ③ 三明治结构的制作不能太紧,也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧的话,可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。

    5、将三明治结构放于转移槽中。

    二、半干转(Semi-dry blot

    1×超快转膜液配制量

    100ml

    500ml

    1000ml

    20×超快转膜液

    5ml

    25ml

    50ml

    甲醇

    20ml

    100ml

    200ml

    超纯水

    75ml

    375ml

    750ml

    2、将滤纸浸泡在1×超快转膜液中,完全浸湿。

    3、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在1×超快

    转膜液中。

    注意:水中漂洗时间一定不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转移。

    4、按照以下顺序做好转印三明治结构。

    正极(阳极)

    上层滤纸

    转印膜

    凝胶

    下层滤纸

    负极(阴极)

    半干转时,滤纸、胶、膜之间的大小,一般是下层滤纸>=>=>=上层滤纸。上下两层的滤纸一定不能接触;滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。

    注意:PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒。

    三、转移条件

    1、湿转

     推荐使用恒流转移,电流可设置350-400mA,转膜液中离子成分较多,可以承受大电流,并且发热量较低。

    分离胶浓度

    建议转膜时间

    推荐蛋白转移范围

    6%

    100-120min

    100-300KD

    8%

    90-100min

    40-300KD

    10%

    30-40min

    25-90kD

    12%

    30-40min

    10-60KD

    15%

    30-40min

    10-40kD

    注:不推荐使用恒压转移,因转膜液中离子成分较多,当电压在100v左右时,电流会达到400mA,此时已达到普通电泳仪器最大电流,随着时间延长,可能无法达到稳定的100v电压。

    2、半干转

    电流

    转膜时间

    300mA

    30 to 35 min

    330mA

    25 to 30 min

    350mA

    25 to 30 min

    375mA

    20 to 25 min

    400mA

    15 to 20 min