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    莫能菌素Monensin 细胞内蛋白运输的抑制剂

            莫能菌素Monensin 细胞内蛋白运输的抑制剂

            流式胞内染色中最常用的活化细胞方法就是用一定浓度的PMA和Ionomycin刺激细胞4-6小时,同时加入蛋白转运抑制剂(通常是monensin或brefeldin A)阻止高尔基体将新分泌蛋白运输到细胞外,从而达到通过流式来检测细胞因子的目的。

    常见的蛋白转运抑制剂:
    Monensin莫能霉素, CAS NO:22373-78-0
    产品简介:莫能菌素是细胞内蛋白运输的抑制剂。莫能菌素在培养细胞中进行孵育会导致蛋白质转运到高尔基体(GC)和内质网(ER)中的蛋白质积聚。在细胞体外活化的最后几个小时内添加莫能菌素可增强细胞内细胞因子的检测。莫能菌素可有效增强大多数小鼠和人类细胞内细胞因子的检测;但是,建议研究人员在其特定的测定系统中评估该试剂以及其他蛋白质转运抑制剂(例如布雷菲德菌素A)的用途和功效。
    Brefeldin A(BFA,布雷非德菌素A), CAS NO:20350-15-6
    产品简介:一种常用的蛋白转运抑制剂,特异性地可逆地阻断蛋白质从内质网(ER)转运到高尔基体(Golgi)。经BFA处理,高尔基体很快被破坏并融合到内质网上,该过程呈现能量、温度和微管依赖性。BFA是一种真菌代谢物,最初曾用作抗病毒试剂,现主要用于研究蛋白转运。BFA也常被用于抑制细胞因子等蛋白的分泌,并用于增强分泌蛋白的免疫染色检测。BFA可激活神经鞘磷脂循环(sphingomyelin cycle),还可诱导一些肿瘤细胞发生凋亡。
    PMA 佛波肉豆蔻醋酸  CAS NO:16561-29-8
    Phorbol 12-myristate 13-acetate( 佛波肉豆蔻醋酸) ,简称为PMA 也称为TPA CAS NO 16561-29-8,一种广泛用于体内外实验的佛波酯(phorbol ester )类PKC激舌剂。PMA可抑制Fas诱导的细胞凋亡,同时又可诱导HL-60细胞的周亡发生。PMA是一种强效的肿瘤促进剂能够诱导小鼠皮肤瘤生成。常常与离子霉素Ionomycin 联合刺激多种免疫细胞,以产生细胞因子。同时也与蛋白转运抑制剂如布雷非德菌素A( Brefeldin A ,) ,莫能霉素( Monensin ) 联合使用抑制细胞因子外分泌,保留在细胞内以准确分析细胞因子表达水平。

    实验参考:


    细胞因子

    克隆号

    靶向细胞

    刺激物

    刺激时间

    蛋白转运抑制剂

    表面标志蛋白

    IL-2

    JES6-5H4

    Splenocytes

    PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1μg/ml)

    4-6 h

    monensin or brefeldin A

    CD3

    IL-3

    MP2-8F8

    Purified CD4+ T cells stimulated with immobilized **-CD3 (10 μg/ml) + soluble **-CD28 (2 μg/ml) + IL-2 (20 ng/ml) + IL-4 (50 ng/ml) for 2 days, wash and then culture in IL-2 + IL-4 for 3-4 days

    PMA (20 ng/ml)plusionomycin (1μg/ml)

    4-6 h

    monensin or brefeldin A

    CD4

    GM-CSF

    MP1-22E9

    Splenocytes stimulated with immobilized **-CD3 (10 μg/ml) + soluble **-CD28 (2 μg/ml) for 2 days, wash and then culture in IL-2 (20 ng/ml) + IL-4 (50 ng/ml) for 3-4 day

    PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1 μg/ml)

    4-6 h

    monensin or brefeldin A

    CD3

    IFN-γ

    XMG1.2

    Splenocytes

    PMA (20 ng/ml) plus ionomycin (1 μg/ml)

    4-6 h

    monensin or brefeldin A

    CD3

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    保存与运输方法

    保存:-20°C避光保存2年有效。运输:冰袋运输。

    注意事项

    为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。