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    溶酶体荧光探针—专题

    溶酶体

    溶酶体为单层膜蛋白包围的内含一系列酸性水解酶的小体。溶酶体中含有多种酶,如糖苷酶、酸性磷酸酶、弹性蛋白酶、组织蛋白酶等等,是物质代谢的场所。

    弱碱性胺选择性聚集在胞内低pH值的小室中,可用于研究溶酶体的生物合成和发病机理。其中最常用的就是DAMP,它不发荧光,需要和抗DNP的抗体共同使用,来观察染色模式。中性红、吖啶橙等荧光探针也常用于酸性细胞器的染色,不过它们缺乏特异性。

    LysoTracker探针就是Invitrogen开发的向酸性荧光探针,用于标记和追踪活细胞中的酸性细胞器。这些探针有几个重要的特征:对酸性细胞器的高选择性,在纳摩尔浓度下能对活细胞有效标记。而且,LysoTracker探针有几种不同的颜色,适合多色标记。

    LysoTracker探针是细胞膜通透性的,一般聚集在球形的细胞器中。研究人员发现探针在极低浓度(~50 nM)下选择性最佳。此外,较大的酸性细胞器在LysoTracker Red DND-99染色后,经过甲醛固定仍保留其染色模式。

    对于那些想研究溶酶体生物发生动力学的研究人员来说,LysoSensor探针可谓量身定做。LysoSensor染料是向酸性的探针,由于质子化作用聚集在酸性细胞器中。质子化也缓解了染料的荧光淬灭,使荧光强度增加。因此,LysoSensor在酸化的环境中表现出pH依赖的荧光强度增加,而LysoTracker探针的荧光则没有明显变化。

    Invitrogen提供了5LysoSensor试剂,pKa不同,颜色各异。LysoSensor Blue DND-167LysoSensor Green DND-189pKa值很低,处于酸性环境中才会发出荧光,而LysoSensor Green DND-153在中性pH下就发出很强的荧光。LysoSensor Yellow/Blue DND-160很特别,具有双激发和双发射峰,是pH依赖的。在酸性细胞器中,它主要发黄色荧光,而在弱酸性细胞器中,荧光则为蓝色。LysoSensor Yellow/Blue DND-160曾与fluo-3 AM共用,来同时测量兔胃腺中H+ Ca2+,以确定类胆碱和cAMP依赖通路激活后胃酸分泌的动力学。

    除了上面这些传统的荧光探针,InvitrogenOrganelle Lights?荧光蛋白也是一个不错的选择。Organelle Lights是即用型的荧光蛋白载体,融合了信号肽,能将表达的荧光蛋白定位到亚细胞器中,如核、质膜、内质网、高尔基体和过氧化物酶体等等。颜色有青、绿、橙、红几种。它通过改造的可用于哺乳动物细胞的杆状病毒(BacMam virus)将荧光蛋白导入胞内,不仅安全,而且适合多种细胞类型,包括原代细胞和神经细胞。你只需要将试剂加到细胞中就行了,既不需要转染,也不需要对细胞做任何处理,用起来相当方便。

    相关产品:

    warbio货号

    产品名称

    Ex/Em

     样本类型

    重要特性

    LX3032

    LysoTracker Green DND-26 溶酶体绿色荧光探针

    73/422

    活细胞

    可被活细胞极快速地吸收;加入染料后 1 5 分钟即可达到最佳成像效果

    LX4032

    LysoTracker Red DND-99 溶酶体红色荧光探针

    577/590

    活细胞

    染料可快速导入,只需纳摩尔级浓度,对酸性细胞器具有高选择性,几乎不对线粒体染色,可用于活细胞中酸性细胞器的标记和追踪

    LX3232

    LysoSensor Green DND-189溶酶体绿色荧光探针

    443/505

    活细胞

    通过质子化作用在酸性细胞器内累积,质子化作用还可解除染料的荧光淬灭性

    LX4232

    LysoSensor Yellow/Blue DND-160 溶酶体黄/蓝色荧光探针

    329/440

    活细胞

    LysoSensor™染料为活细胞染料,在pH7 时无荧光,酸化后,荧光强度的增加具有 pH依赖性

    LX5232

    LysoSensor Blue DND-167溶酶体蓝色荧光探针

    373/425

    活细胞

    LysoSensor™染料为活细胞染料,在pH7 时无荧光,酸化后,荧光强度的增加具有 pH依赖性

    注:探针标记细胞后,只能用荧光显微镜观察,而不能用流式或荧光酶标仪检测,因为在总细胞荧光中溶酶体荧光只占非常小的比例