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Zymolyase-100T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶

货号
wb30220
售价(元)
13880
规格
5g
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    货号

    产品名称

    规格

    价格

    wb30200

    Zymolyase-20T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶

    200mg

    998

    wb30210

    Zymolyase-20T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶

    1g

    3689

    wb30220

    Zymolyase-100T from Arthrobacter luteus 酵母溶壁酶

    5g

    13880

    产品简介:

    Zymolyase-20T(酵母裂解酶-20T)是通过Arthrobacter luteus(藤黄节杆菌)深层培养获得的酶制剂,它能有效的裂解活酵母细胞细胞壁。该制剂是利用亲和层析法部分纯化获得的冻干酶,其酶活单位是100,000 单位/g.其中主要负责裂解活酵母细胞的酶成分是ß-1,3-葡聚糖昆布五糖水解酶,通过对ß-1,3-葡聚糖连接位水解葡萄糖聚合物,释放产物主要是昆布五糖。

    单位定义:800nm条件下菌液吸光度下降30%,表示一个活力单位。

    特异性:此产品的裂解谱包括以下属的生物:Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloekera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomcopsis, Saccharomycodes, Schwannimomyces and others.

    用途:可用于细胞裂解、原生质球形成及葡聚糖水解。

    说明:酵母细胞的裂解程度随酵母菌的种类、生长阶段及培养条件而改变。

    声明: Zymolyase是麒麟麦酒股份有限公司(Kirin Brewery Co., Ltd)的注册商标。

    储存:冻干状态于2-8°C中保存,若30°C下放置3个月约失去90%活力。

    外观:冻干粉

    活力:100,000单位/g

    核心酶:ß-1,3-葡聚糖昆布五糖水解酶

    其他酶: ß-1,3-葡聚糖酶,约1.0 x 107 单位 /g

             蛋白酶,约1.7 x 104单位 /g

            甘露聚糖酶, 6.0 x 104单位 /g

            淀粉酶,木聚糖酶,***酶,微量DNaseRnase(未检出)

    催化剂:二硫苏糖醇(DTT, ß-巯基乙醇及其他的巯基化合物(如半胱氨酸)

    最适pH及温度:

         pH 7.5, 35°C裂解活酵母细胞

         pH 6.5, 45°C水解酵母葡聚糖

    pH范围:pH 5-10间保持稳定

    热稳定性:60°C5min丧失细胞溶解能力

    警告:(1ZymolaseØ-100T溶解度低,以悬浮液的状态使用。如果需制备浓度超过0.05%的无菌酶溶液,则通过将ZymolaseØ-100T溶解在含5%葡萄糖的缓冲液中(pH 7.5),首先配制2%的酶储存液;(2)吸取悬浮液,留下沉至容器管底的任何物质;(3)不推荐使用**纤维过滤器;(4)稀释无菌的酶悬浮液至目标浓度。

    原生质球制备程序:

    1.室温条件,5000rpm3000 xg),5min离心酵母培养物;

    2.收集离心沉淀物(酵母细胞)并记录湿重;

    3.用TE缓冲液悬浮细胞,加入量为1.4ml/g湿重细胞;(TE缓冲液配方:100 mM Tris pH 8.0100 mM EDTA

    4.双蒸水快速定容,终体积量为3.5ml/g湿重细胞;

    5.按照17.5 ul (总体积的1/200)/ g湿重细胞的量加入ß -巯基乙醇,目的是为了除去细胞外层中的甘露聚糖层;

    6. 30°C轻摇温育混合液,处于对数期生长的培养物处理15min,处于稳定期生长的培养物处理45min

    7.室温条件,5000rpm离心5min

    8.用S缓冲液重新悬浮细胞,加入量为4.0ml/g湿重细胞;(S缓冲液配方:1.0 M 山梨糖,10 mM PIPES , pH 6.5

    9. 5000rpm离心5min

    10.再次用S缓冲液(4.0ml/g湿重细胞)悬浮细胞,另外加入Zymolyases50U /g湿重细胞);如果Zymolyases配制成附录所示的溶液,则添加250ul即可。最好根据实验情况最先优化酶使用量。

    11.   30°C轻摇温育混合液30min,根据以下方式监测原生质球形成程度:

    1)加1ul样品到20ul S 缓冲液内,原生质球应该保持完整;

    2)加1ul样品到20ul双蒸水中,原生质球应该破裂;显微镜下观察比较两个样品的形态差异。

    12.一般情况下反应45-60min,原生质球的形成量>90%,此时4oC下离心收集细胞,5000rpm5min

    13. 再次用S缓冲液(2 ml/g湿重细胞)悬浮原生质球,5000rpm离心5min;重复此步骤做第二次清洗;;

    14.原生质球离心沉淀物-70oC冻存。

    裂解原生质球获取细胞核:

     温和的裂解原生质球方法如下; 3倍体积的18%Ficoll溶液悬浮细胞离心沉淀物,Ficoll溶解于含有0.5 mM CaCl210 mM PIPES 缓冲液内,pH 6.5

    酵母菌基因组DNA的制备:

     以下步骤快捷,适合于从少量酵母培养物中制备基因组DNA

    1.  将过夜培养的10ml酵母菌培养物离心收集细胞,加入280ul TE Buffer(配方见原生质球制备程序中的步骤3),300 ul双蒸水,3 ul ß -巯基乙醇;

    2.  30oC温育45min

    3.  以台式离心机的最高速度离心2-3s,弃上清液,沉淀物用500 ul S 缓冲液(配方见原生质球制备程序中的步骤8)悬浮.;再次离心弃上清

    4. 用500 ul含有1 mg/ml Zymolyase 20TS缓冲液悬浮细胞沉淀物(或者使用自己认为最合适的酶浓度);

    5. 30oC温育1小时;

    6.  重复步骤3

    7.  用200 ul含有0.1%SDS2ug蛋白酶K (warbio: J6109)TE 缓冲液悬浮细胞沉淀物;

    8.     37oC温育3小时,不时的混匀溶液;

    9.     调水浴锅的温度至65oC,并温育20min

    10.  从水浴锅内取出并冷却至室温;

    11.  用200ul 1:1Tris饱和酚-氯仿混合液萃取,漩涡混匀并离心;从离心机内取出并保留上清液;

    12.  用200ul氯仿萃取上清液,之后重复漩涡混匀及离心;

    13.  加入500ul95%乙醇到上清液内,20oC沉淀10min

    14.  4oC下,15,000 xg离心20 min

    15.  自然风干或者于真空离心蒸发浓缩器内晾干除去多余的乙醇,并加入200ul TE缓冲液(含有150 mM NaCl1 ug核糖核酸酶A (warbio: J4931))溶解DNA;

    16.  37oC温育1小时;

    17.  重复步骤1112

    18.  加入2.5倍体积的95%乙醇,20oC沉淀10min

    19.  30ul双蒸水重悬DNA。对1:500DNA稀释液测量A260,根据消光系数计算DNA产量;

    20.  产量大约为40-50ug

    附录:

    制备Zymolyase 100T溶液:

    以下配制的溶液适用于该产品的实验程序中(但并不排除其他类型的母液也适用)

    配制200单位/ml的母液,将冻干粉溶于已高压灭菌的S缓冲液(配方见原生质球制备程序中的步骤8)。

    如果不被微生物污染,于4 oC下,此母液能2个星期以上时间内保持高效;

    注意事项

    为了您的健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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