欢迎莅临南京bob综合app手机客户端bobapp官方下载苹果版有限公司官方网站!

当前位置: 首页 - 产品目录 - 钙离子检测

Rhod-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

货号
T0404
售价(元)
845.5
规格
50μg
CAS号
  • 产品简介
  • 相关产品
  • 货号

    名称

    规格

    价格

    T0404

    Rhod-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    50μg

    845.5

    T0405

    Rhod-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    5×50μg

    2973.5

    产品简介


    Rhod-2虽然是最受欢迎的红色荧光Ca2+荧光探针,但Rhod-2的线粒体定位和细胞中高基底Ca2+信号使其在某些细胞应用中严重受限制。另外,Rhod-2488nm处很不理想的激发波长使其在某些只有488nm激发光源的仪器比如FLIPRTM上信号很弱。Rhod-4正是根据这些缺陷而改进的,具有以下特征:

    1) Rhod-4的最大激发和发射波长是530nm555nm。虽然Rhod-4最大激发波长是530nm,但在488nm处激发下的信号也相当强。除了能在514nm532nm546nm的长波长激发之外,Rhod-4用氩离子激发器在488nm激发下也能得到理想的荧光信号。Rhod-4随着增加的Ca2+浓度荧光信号而增强(555nm发射波长),一旦与Ca2+结合荧光约增强>200倍。由于许多细胞受刺激后的Ca2+浓度提高通常是5~10倍,因此,Rhod-4是一款优秀的检测此范围内Ca2+浓度变化的高灵敏探针。

    2) 一旦受激动剂刺激后,Rhod-4在细胞内的荧光明显强于Rhod-2(信噪比)。更重要的是,Rhod-4主要定位在细胞胞浆内,不像Rhod-2主要定位在线粒体。另外,Rhod-4具更低的温度依赖性的细胞加载特性,不管室温还是37℃产生相似的结果。这一特征使Rhod-4Rhod-2HTS应用中更有优势。

    Rhod-4, AM是Rhod-2的一种乙酰甲酯衍生物,具有细胞膜渗透性,只需简单培养,即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内,即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Rhod-4,从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供,使用时只需经无水DMSO充分溶解,配置成2~5mM的储存液,并依据具体实验和相关文献资料调整到需要的工作浓度即可。

    基本特性

    1) 同义名:Rhod-4, Acetoxymethyl Ester

    2) 分子量:1015.96

    3) 外观:红色固体

    4) 最大激发/发射波长:530/555 nm

    5) KdCa2+结合):525NM

    6) 溶解性:溶于DMSO2~5mM

    保存与运输方法

    保存:-20℃干燥避光保存,至少一年有效。

    运输:室温运输。

    注意事项

    1) 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

    2) 乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量,开封前请将其短暂离心,以保证粉末落入管底。

    3) Rhod-4, AM4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

    4) Rhod-4, AM第一次使用,建议储存液现配现用,分装成单次用量,严格做到≤-20℃密封干燥冻存,以防止受潮。为了保证良好的实验效果,尽量在短时间内使用。

    5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    使用方法

    【注意】以下使用方法仅用作参考,可根据具体的实验条件做出调整。

    A, 试剂准备

    1) 配制Pluronic F-127母液:称取100mg Pluronic F-127粉末(货号:S1163)中加入500μl DMSO,配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不用冷藏。如有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。

    2) HHBS Buffer(1X Hanks Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3) 或者其他生理缓冲液

    B,操作步骤

    1) 用无水DMSO溶解Rhod-4, AM配制成2-5mM的储存液,或将已配好的Rhod-4, AM储存液取出于室温回温。(如:若配制成4mM的母液,需向50µg Rhod-4, AM中加入12.3µl 无水DMSO)。准备Rhod-4, AM工作液之前,有时需要往Rhod-4, AM储存液中加入适量的20% Pluronic F-127溶液,以增强AM探针的水溶性。

    【注①】:Rhod-4, AM染色工作液制备前,添加等体积20% Pluronic F-127溶液到Rhod-4, AM+DMSO储存液,从而使Pluronic F-127的最终工作浓度约为0.02%

    【注②】:Pluronic F-127可以防止AM探针在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低AM探针的稳定性,因此只建议在配制工作液时加入,不建议加入储存液长期保存。

    2) 用HHBS或其他生理缓冲液将 Rhod-4, AM+DMSO储存液稀释到1-10µM的工作液。

    【注①】:Rhod-4,AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM,具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

    【注②】:Rhod-4, AM工作液需现配现用,避免反复冻存。

    3) 【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体,丙磺舒(Probenecid1-2.5mM)或磺吡酮(Sulfinpyrazone0.1-0.25mM)可能需要加入细胞培养基内,以降低去酯化探针的泄露水平。

    【注①】:丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱,因此加入培养基后需要重新调整pH

    4) 将准备好的Rhod-4, AM工作液加入细胞,加入量以覆盖细胞为准。室温或37℃孵育30min-1h

    【注①】:若使用含血清的培养基,血清内酯酶会降解AM,从而降低Rhod-4, AM加载效果。而含酚红培养基会使本底值略偏高,建议加入染色工作液前,对细胞清洗2~3次。

    【注②】:关于孵育的时间,如果首次做实验不能确定,建议先孵育30min,看荧光效果;如果细胞死亡较多,适当缩短时间;如果荧光强度太弱,适当延长时间。

    【注③】:降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

    5) 吸掉染色工作液,并用HHBS或其他生理缓冲液(如有必要,使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺舒的缓冲液)清洗细胞1~2次,以去除残留探针。

    6) 室温再孵育30min以保证细胞内AM的完全去酯化。

    7) 用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪,以及波长Ex/Em=530/555 nm来进行检测。



    产品相关:

    货号

    名称

    规格

    价格

    T5022

    Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    50μg

    361

    T5042

    Fura-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    5×50μg

    1368

    T5062

    Fluo-3, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    50μg

    427.5

    T5082

    Fluo-3, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    5×50μg

    1805

    T5040

    Fluo-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    50μg

    427.5

    T5060

    Fluo-4, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    5×50μg

    1805

    T5080

    Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    50μg

    427.5

    T5060

    Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    5×50μg

    1805

    TG201

    Indo-1, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    50μg

    399

    TG221

    Indo-1, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    5×50μg

    1591.25

    T0402

    Rhod-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    50μg

    427.5

    T0403

    Rhod-2, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    5×50μg

    1805