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Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

货号
T5060
售价(元)
427.5
规格
50μg
CAS号
  • 产品简介
  • 相关产品
  • 货号

    名称

    规格

    价格

    T5060

    Fluo-8 AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    50μg

    427.5

    T5080

    Fluo-8, AM, Cell Permeant 钙离子荧光探针

    5×50μg

    1805

    产品介绍


    Fluo-8,是目前最亮的可见光激发波长Ca2+荧光探针,其荧光强度比Fluo-4强两倍,比Fluo-3强四倍。Fluo-8具中等程度的Ca2+亲和力,几乎接近Fluo-3,Fluo-4(Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM),使用上几乎同Fluo-3和Fluo-4。

    Fluo-8不仅维持Fluo-3,Fluo-4便捷的光谱检测特性,与Ca2+结合后的最大激发波长为490nm,最大发射波长为514nm。而且具有改善的细胞载入和Ca2+响应能力。Fluo-8加载具较弱的温度依赖性,在室温或37℃孵育皆染色良好,不像Fluo-3,Fluo-4严格要求在37℃孵育,此特征使其更适用于HTS高通量筛选实验。Fluo-8应用广泛,与许多细胞系和靶向样本兼容,不会受配体或靶标本身信号干扰。Fluo-8可通过激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪、荧光显微镜等来检测胞内钙离子水平的变化。

    Fluo-8, AM是Fluo-8的一种乙酰甲酯衍生物,具有细胞膜渗透性,只需简单培养,即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内,即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Fluo-8,从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以50μg小包装的冻干粉形式供货,用于细胞内Ca2+水平检测时,常用浓度为1-5μM。

     产品性质

    同义名:Fluo-8, Acetoxymethyl Ester;Fluo-2, AM; Fluo-2 Medium Affinity, Acetoxymethyl Ester;

    化学名:Bis(acetoxymethyl) 2,2′-((4-(6-(acetoxymethoxy)-3-oxo-3H-xanthen-9-yl)-2-(2-(bis(2-acetoxymethoxy)-2-oxoethyl)amino)phenoxy)ethoxy)phenyl)azanediyl)diacetate

    分子式:C50H50N2O23

    分子量:1046.93

    最大激发/发射波长:490/514 nm(Ca2+结合)

    溶解性:溶于DMSO(1~5mM)

    注意事项

    1)荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

    2)乙酰氧基甲基酯(AM)易吸潮,冰箱取出后请在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂微量,开封前请将其短暂离心,以保证粉末落入管底。

    3)Fluo-8, AM在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可在20-25℃温育片刻至全部融解后使用。

    4)Fluo-8, AM第一次使用,建议储存液现配现用,分装成单次用量,严格做到≤-20℃密封干燥冻存,以防止受潮。为了保证良好的实验效果,尽量在短时间内使用。

    5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    使用方法

    【注意】以下使用方法仅用作参考,可根据具体的实验条件做出调整。

    A、试剂准备

    1. 配制Pluronic F-127母液:称取100mg Pluronic F-127粉末中加入500μl DMSO,配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不用冷藏。如有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。

    2. HHBS Buffer(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer, pH 7.3)或者其他生理缓冲液

    B,操作步骤

    1. 用无水DMSO溶解Fluo-8, AM配制成1-5mM的储存液,或将已配好的Fluo-8, AM储存液取出于室温回温。(如:若配制成4mM的母液,需向50µg Fluo-8,AM中加入11.9µl无水DMSO)。

    2. 用HHBS或其他生理缓冲液将Fluo-8, AM+DMSO储存液稀释到1-10µM的工作液,提前加入适量的20% Pluronic F-127溶液,使其终浓度为0.02%。

    【注①】:Fluo-8, AM应用在大部分细胞的推荐加载浓度为4-5µM,具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性,建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

    【注②】:Fluo-8, AM工作液需现配现用,避免反复冻存。

    【注③】:Pluronic F-127可以防止Fluo-8, AM在溶液中聚合并促使探针更好进入细胞。但Pluronic F-127可降低Fluo-8, AM的稳定性,因此只建议在配制工作液时加入,不建议加入储存液长期保存。

    3.【可选】如果细胞内含有机阴离子转运体,丙磺舒(Probenecid,1-2.5mM)或磺吡酮(Sulfinpyrazone,0.1-0.25mM)可能需要加入细胞培养基内,以降低去酯化探针的泄露水平。

    【注①】:丙磺舒或磺吡酮储存液相当偏碱,因此加入培养基后需要重新调整pH。

    4. 将准备好的Fluo-8, AM工作液加入细胞,加入量以覆盖细胞为准。37℃或者室温孵育20-60min。

    【注①】:关于孵育的时间,如果首次做实验不能确定,建议先孵育30min,看荧光效果;如果细胞死亡较多,适当缩短时间;如果荧光强度太弱,适当延长时间。

    【注②】:降低探针加载温度可能会降低探针的区室化现象。

    5. 吸掉染色工作液,并用HHBS或其他生理缓冲液(如有必要,使用含转运体抑制剂如2.5mM丙磺酸的缓冲液)替换,以去除多余探针。

    6. 用适当的仪器如激光共聚焦、流式细胞仪、荧光酶标仪,以及波长Ex/Em=490/520 nm来进行检测。

    【注①】:Fluo-8, AM进入胞内后,经酯酶降解形成Fluo-8,并不是以共价结合的形式滞留在细胞质内。因此不可对加载染料的活细胞进行固定处理,再进行Ca2+水平检测。

    保存与运输方法

    保存:-20℃干燥避光保存,有效期一年。

    运输:室温运输。


    产品相关:

    货号

    名称

    规格

    价格

    WU060

    Ionomycin, Free Base 离子霉素(游离酸)

    1mg

    535

    WU070

    Ionomycin, Free Base 离子霉素(游离酸)

    5mg

    1720

    WU072

    Ionomycin, Calcium Salt 离子霉素(钙盐)

    1mg

    535

    WU074

    Ionomycin, Calcium Salt 离子霉素(钙盐)

    5mg

    1720

    WU055

    Calcium Ionophore A23187钙离子载体

    1mg

    320

    WU056

    Calcium Ionophore A23187钙离子载体

    5mg

    1100

    WU057

    Calcium Ionophore 4-bromo-A23187 钙离子载体

    1mg

    1200

    WU065

    Brefeldin A (BFA, 5mg/ml)  布雷非德菌素A5mg/ml

    1ml

    1500

    WU085

    Brefeldin A (BFA, Powder)  布雷非德菌素A(粉末)

    5mg

    1200